在治療性抗體開發(fā)中，快速識別具有可開發(fā)潛力的候選分子至關(guān)重要。研發(fā)人員亟需高效策略，在早期階段即剔除存在缺陷的候選分子，從而將研發(fā)資源集中于先導(dǎo)分子。

01. MaxCyte工作流程：

采用工程化CHO細胞系（含F(xiàn)lp重組酶介導(dǎo)的靶向整合位點），與Flp重組酶表達質(zhì)粒及編碼抗生素抗性基因的IgG質(zhì)粒文庫共轉(zhuǎn)染。電穿孔后細胞經(jīng)短時間恢復(fù)培養(yǎng)，隨后轉(zhuǎn)移至含抗生素的選擇性培養(yǎng)基中連續(xù)擴增培養(yǎng)9天。篩選結(jié)束后，收集約 500 萬細胞，提取mRNA，進行反轉(zhuǎn)錄并用于高通量測序分析。

02. 實驗結(jié)果

MaxCyte電穿孔技術(shù)具有良好的可擴展性和可重復(fù)性，能夠在操作流程更簡便、更快速的前提下，實現(xiàn)更優(yōu)的序列多樣性與更全面的文庫覆蓋度。

如下圖A所示，在所有測試的細胞數(shù)量條件下，MaxCyte電穿孔所獲得的序列多樣性均高于對照電穿孔方法。此外，由于另一種方法每次僅能轉(zhuǎn)染約500萬個細胞，因此每輪實驗需要進行多批次轉(zhuǎn)染。相比之下，MaxCyte電穿孔可在任意細胞數(shù)量下通過單次處理完成高效轉(zhuǎn)染，大大簡化了操作流程。

進一步通過Morisita重疊指數(shù)對兩種電穿孔方法在不同實驗條件下的文庫代表性進行了評估（見下圖C）。結(jié)果顯示，與原始質(zhì)粒文庫（淺藍色方框）相比，MaxCyte電穿孔所得樣本的Morisita重疊指數(shù)普遍更高，表明其生成的細胞群體在表達IgG序列方面更接近原始文庫。

此外，比較同種方法在不同批次間轉(zhuǎn)染結(jié)果的一致性（黑色方框），MaxCyte方法的最小重疊指數(shù)高達0.96，充分體現(xiàn)了MaxCyte電穿孔技術(shù)在實驗重復(fù)性和操作一致性方面的顯著優(yōu)勢。

03. 總結(jié)：

MaxCyte電穿孔技術(shù)能夠顯著提升序列多樣性和文庫覆蓋度，其技術(shù)優(yōu)勢包括：